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UMR 7286 - Centre de Recherche en Neurobiologie et Neurophysiologie de Marseille

PCR quantitative

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Plateau technique de PCR quantitative

La PCR quantitative est une méthode précise et sensible pour quantifier des séquences d’ADN. Elle peut être réalisée à partir d’ADN génomique ou d’ADN complémentaire obtenu par transcription inverse à partir d’ARN.

La réaction de PCR s’effectue en utilisant des amorces nucléotidiques spécifiques de la région à quantifiée et des composés se liant à l’ADN et donnant un signal fluorescent proportionnel à la quantité d’ADN formé à chacun des cycles de PCR.

L’analyse des courbes d’amplification permet de quantifier la quantité de produit de départ en utilisant des gammes de calibration ou en effectuant une comparaison relative entre échantillons (par exemple pour la validation de puces à ADN ou pour confirmer l’extinction de l’expression d’un gène par siRNA).

Mission

Le but de la plateforme est de faciliter l’utilisation de la technique de qPCR aux membres du CRN2M. La plateforme est aussi ouverte aux autres chercheurs présents sur le site. Les chercheurs d’autres campus ou des utilisateurs du privé peuvent aussi avoir accès à la plateforme. Pour tout renseignement concernant les tarifs veuillez contacter le coordinateur scientifique de la plateforme.

Equipement

Depuis juillet 2008 la plateforme possède deux appareils de qPCR Applied Biosystems 7500 Fast équipés de blocs chauffants de 96 puits. Avec ce type d’appareil il est possible d’utiliser les technologies SybrGreen, Taqman, “Molecular beacons » ou Scorpion. Ces appareils permettent la lecture d’un grand nombre de fluorophores : FAM™/SYBR® Green I, VIC®/JOE™, NED™/ TAMRA™/ Cy3™, ROX™/Texas Red®, and Cy5™. Ces appareils fonctionnement en mode « fast » permettant la délivrance de résultats de très bonne qualité en 40 minutes. La plateforme a récemment fait l’acquisition d’une hotte UV avec filtration HEPA pour éviter toute contamination lors de la préparation des échantillons. Les utilisateurs doivent fournir le matériel (plaque PCR) et les réactifs nécessaires à la réaction.

Coordinateur Scientifique :
  • Jean-Louis Franc, DR CNRS
  • Courriel : jean-louis.franc univ-amu.fr
  • Téléphone : : +33 491 69 87 61

Le CRN2M en chiffres

  • 27 Chercheurs
  • 22 Enseignants Chercheurs
  • 43 ITAs et IATOs
  • 4 Post-Docs
  • 11 Docs
  • 4 Étudiants de Master

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